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反相高效液相色譜結合柱前衍生化法測定人血清中L-門冬酰胺

作者: 2018年12月21日 來源:全球化工設備網 瀏覽量:
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氨基酸是蛋白質的基本結構單位,是人體完成生理功能的必須物質,人類許多疾病的發生和發展與血液循環中氨基酸的變化有密切聯系。因此,血液中氨基酸水平在臨床中可作為一些疾病的診斷指針。監測體內氨基酸水平的變化

   氨基酸是蛋白質的基本結構單位,是人體完成生理功能的必須物質,人類許多疾病的發生和發展與血液循環中氨基酸的變化有密切聯系。因此,血液中氨基酸水平在臨床中可作為一些疾病的診斷指針。監測體內氨基酸水平的變化,對疾病的診斷和治療有重要參考價值。

   門冬酰胺是機體合成蛋白質的重要氨基酸之一,在體內可水解為門冬氨酸和氨,體內正常細胞也可通過門冬酰胺合成酶合成L-ASN。1996年,Yellin and Wriston研究發現淋巴瘤細胞中門冬酰胺合成酶活性低,不能合成足夠的L-ASN,必須從血液循環只能獲取L-ASN以合成蛋白質,門冬酰胺酶能催化L-ASN水解,迅速耗竭血液循環中的L-ASN,使腫瘤細胞不能獲得足夠的L-ASN導致蛋白合成抑制而凋亡,故門冬酰胺酶對淋巴瘤細胞有選擇性細胞毒作用。目前,天然的火聚乙二醇修飾的ASNase已成為兒童急性淋巴細胞白血病聯合化療方案中的重要組成部分,對維持患兒持續完全緩解(CCR)起著不可替代的作用。

    本文建立網絡鄰苯二甲醛柱前在線衍生反相高效液相色譜法,在方法學建立時采用L-ASN耗竭空白人血清作為空白生物基質,能夠快速、準確測定人血清中L-ASN,在臨床研究中可用于監測ASNase治療過程中患兒體內L-ASN的耗竭程度,為優化給藥方案,降低不良反應提供重要依據。

儀器準備

 

儀器簡介

    LC-600A智能全控液相色譜系統由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構成等度分析系統。使用WS600工作站可以同時控制數臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。

 

應用領域

化合物檢測、法醫毒物分析、蛋白質組學食品檢測、藥物分析、環境分析、聚合物分析

譜條件:

 

色譜柱

 Agilent ZORBAX Zclipse AAA(4.6mm×150mm,5μm)

流動相

A:0.01mol.L磷酸鹽緩沖液(pH=7.8)

B:水-甲醇-乙腈(10:45:45)

梯度洗脫程序

0-17min,29%B,18-32min,100%B,33-37min,29%B;

進樣量

 15μL

 流速

1ml/min

 

測定結果

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