二手質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)與蛋白質(zhì)分析

二手串連質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)的糖蛋白

糖蛋白在細(xì)胞內(nèi)部，細(xì)胞膜和細(xì)胞外均有發(fā)現(xiàn)，大部分蛋白質(zhì)是糖蛋白。對糖蛋白的檢測和分析發(fā)現(xiàn)，糖蛋白中糖組分的結(jié)構(gòu)和功能具有多樣性。糖蛋白中的糖通常是不同種類的，而且是由一些可控數(shù)量的單糖組成。糖基化的多樣性與細(xì)胞周期，細(xì)胞分化和發(fā)展的狀態(tài)有關(guān)。在蛋白組時代中，蛋白質(zhì)的修飾會引起其理化性質(zhì)的改變，因此是不容忽視的。

從1D或2D凝膠得到的糖基化蛋白的識別，一般是進(jìn)行MALDI-MS指紋分析，或是對MALDI-PAD或ESI-MS/MS得到的碎片譜進(jìn)行分析。對完整的糖蛋白的研究是非常困難的，所有已知的離子化技術(shù)都有其局限性。目前，人們主要研究糖肽，其好處之一就是質(zhì)量減小了，這就會得到更好的分辨率，而且糖肽仍保留了糖基化位點(diǎn)。將分離的糖蛋白用不同的蛋白酶消化后就可進(jìn)行糖肽的研究。一旦糖肽被識別出，就可以用串連質(zhì)譜(ESI-MS/MS)來闡明肽序列。當(dāng)?shù)鞍椎男蛄幸阎獣r，計算質(zhì)量差就可推出其上附著的寡糖的質(zhì)量。

二手LCMSMS質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)中磷酰氨基酸
蛋白質(zhì)中氨基酸的磷酸化在生命系統(tǒng)中起重要的作用。磷酸化經(jīng)常作為分子開關(guān)控制不同過程蛋白質(zhì)的活性，如新陳代謝，信號傳導(dǎo)，細(xì)胞分裂等過程。因此，蛋白質(zhì)中磷酰氨基酸的識別在蛋白質(zhì)分析中是一項重要的工作。

已知的磷酰氨基酸的類型有四種：
(1)O-磷酸鹽，通過羥氨酸的磷酸化形成的，如絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。
(2)N-磷酸鹽，通過精氨酸，賴氨酸或組氨酸中的氨基的磷酸化形成的。
(3)乙酰磷酸鹽，通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成的。
(4)S-磷酸酯，通過半胱氨酸的磷酸化形成的。

用質(zhì)譜分析磷酸化時主要存在的問題是，混合物中磷酸化肽的信號被抑制。因此只有當(dāng)一些非磷酸化肽的含量降低(或磷酸化的肽被富集)后,分析磷酸化的肽才會變得容易些。一些相應(yīng)的用于質(zhì)譜分析的前磷酸化肽或磷酸化蛋白質(zhì)的分離和富集方法和技術(shù)已有所發(fā)展，現(xiàn)已建立的分離技術(shù)有：雙向磷酸多肽譜圖(2D-PP)，高分辨率的凝膠電泳(2DE)和反相高效液相色譜(RP-HPLC)。對于32P標(biāo)記的磷酸化肽或蛋白可用放射自顯影或磷儲屏檢測，提取后可以高靈敏度MALDI-MS分析；如果32P標(biāo)記不可行，就要用二手LC-MS-MS分析，常用HPLC與質(zhì)譜聯(lián)用。